小鼠诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用 

预期应用

ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中iNOS含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中iNOS水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入iNOS、生物素化的抗小鼠iNOS抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的iNOS呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1. 酶联板：一块（96孔）

2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为80 U/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成80 U/mL，40 U/mL ，20 U/mL，10 U/mL，5 U/mL，2.5 U/mL，1.25 U/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 U/mL，临用前15分钟内配制。

如配制40 U/mL标准品：取0.5ml 80 U/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。

4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6. 检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A 1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7. 检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测溶液A。

8. 底物溶液：1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H₂SO4）。

标本的采集及保存

1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。

2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于10