00 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。 3.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。 注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤 实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100ul(取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),<?xml:namespace prefix = st1 /> 3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100ul, 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。 6. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 注: 1. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 2.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。 3. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2 4. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。 洗板方法 特异性 本试剂盒可同时检测重组或天然的小鼠iNOS,且与其它相关蛋白无交叉反应。 计算 以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项 1. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。 2. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 3. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。 4. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。 5.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。 6.底物请避光保存。 检测范围: 1.25 U/mL -80 U/mL 说明 1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。 2.有效期:6个月 3.浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。 5.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。 2/2 首页上一页12 |